
近日,农工党广东省委会委员、华南理工大学总支主委,华南理工大学生物科学与工程学院教授林章凛课题组通过RecE/RecT介导的同源重组方法将53.4 kb原始菌株基因组替换为了55.1 kb合成基因组,文章发表于国际合成生物学领域权威刊物ACS Synthetic Biology,题为:Genomic Iterative Replacements of Large Synthetic DNA Fragments in Corynebacterium glutamicum。
研究者以谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032 为研究对象,选取了54.3 kb 基因组区域(3,156,174 – 3,210,459,无插入序列元件) 为目标替换序列。为最终获得无抗性的合成基因组,研究者将谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032 编码核糖体蛋白S12的rpsL基因突变为rpsLK43R,使其具有链霉素抗性,当存在另一拷贝野生型rpsL时,会丧失链霉素抗性,并在合成基因组最后一个片段上添加rpsL,通过链霉素反筛获得无抗菌株。目前,已报道3对重组酶在谷氨酸棒状杆菌中可正常行使功能,其中RecE/RecT重组效率最高。最后,研究者通过诱导4 h或8 h表达重组酶,验证了所插入loxPsym位点可实现基因组缺失(30 kb)、倒位和易位,体现了合成型谷氨酸棒状杆菌基因组的遗传可塑性。
该研究建立了一种基于同源重组的谷氨酸棒状杆菌基因组迭代替换方法,为谷氨酸棒状杆菌的基因组合成和代谢工程研究提供了新思路,得到了国家重点研发专项(2017YFC1601202)等项目的支持。(办公室、华南理工大学总支)
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